市场资讯
流式细胞询价咨询「多图」mac地址是什么
2023-11-24 12:54  浏览:28
5分钟前 流式细胞询价咨询「多图」[英瀚斯2eefa30]内容:

小鼠精原gan细胞分离富集和培养

成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02~0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清终止消化,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(CD90.2)阳性CD117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,CD90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 CD117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,CD90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无显著性(P>0.1),CD90.2阳性细胞和CD117阴性和CD90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有显著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经FACS分选后获得细胞纯度

流式细胞分选

流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。一般流程:细胞收集-PI-AnnexinV标记-流式细胞仪检测。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,保证样本中目标细胞的高回收率。

细胞培养中常见的污染及解决方法

原生动物污染

原生动物污染后,细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下,大量的小点来回移动。软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:(1)取对数生长期细胞,用0。虽然此时细胞仍能生长,但繁殖速度减慢,细胞生长状态不好,边缘不清,变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时,原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍,但以细胞为主,因为原生动物的数量相对较少,因而对细胞的正常生长没有影响,只有当它们达到一定数量时,才终爆发成为循环。

解决方法:原生动物污染的原因有很多,如液体消毒问题、操作问题、环境问题等,如果细胞足够,果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留,需要购买使用相关的灭菌试剂。

Q:如何避免中沉淀物的出现?

A:首先要注意正确的解冻步骤,而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加,使用中应该尽量避免:

(1)热灭活;

(2)在 37℃ 下培养;

(3)反复冻融;

(4)γ 射线照射;

(5)长期储存在 2-8℃;

(6)在室温下放置时间过长

Q:如何去除中的沉淀?

A:如想去除这些絮状沉淀物,可以将分装到无菌离心管中,以400g离心,上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。

注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。

发表评论
0评